登革熱IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
登革熱IgG檢測試劑盒產(chǎn)品詳細(xì) | 中文名稱 | 登革熱IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） | | 英文名稱 | Dengue virus IgG ELISA | | 產(chǎn)品貨號 | RE58671 | | 產(chǎn)品規(guī)格 | 96T | | 檢測樣本 | 血清、血漿 | | 適應(yīng)物種 | 人 | | 預(yù)期用途 | 可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測 | | 產(chǎn)品品牌 | 德國IBL | | 供應(yīng)商家 | 深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 |
登革熱IgG ELISA試劑盒預(yù)期用途
登革熱IgG ELISA試劑盒可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測。
登革熱IgG檢測試劑盒組成成分
| 名稱 | 數(shù)量 | 成分 | | 微孔板 | 12×8可拆板條 | 包被有登革熱2型抗原，真空密封于鋁鉑金屬袋中 | | 樣品稀釋液 | 1瓶x100ml | 內(nèi)含100ml樣品稀釋用緩沖液，pH2±0.2，液體為黃色，待用，白蓋 | | 終止液 | 1瓶x15ml | 內(nèi)含15ml硫酸，0.2mol/l；待用，紅蓋 | | 洗滌液20×濃縮 | 1瓶x50ml | 含20倍濃縮的樣品洗滌液，pH7.2±0.2，白蓋 | | 酶聯(lián)物 | 1瓶x20ml | HRP標(biāo)記的兔抗人IgG，藍(lán)色，待用，黑蓋。 | | 底物液 | 1瓶x15ml | TMB，待用，黃蓋。 | | 陽性質(zhì)控 | 1瓶x2ml | 黃色，待用，紅蓋 | | 臨界質(zhì)控 | 1瓶x3ml | 黃色，待用，綠蓋 | | 陰性質(zhì)控 | 1瓶，2ml | 黃色，待用，藍(lán)蓋 |
登革熱IgG檢測試劑盒檢測原理
抗登革熱病毒IgG抗體的定性酶免檢測利用的ELISA技術(shù)。微孔板上預(yù)先包被了結(jié)合樣品相關(guān)抗體的登革熱病毒2型抗原。洗板除去未結(jié)合的樣品物質(zhì)后，加入辣根過氧酶標(biāo)記的抗人IgG酶聯(lián)物。這一酶聯(lián)物可與捕獲到的登革熱病毒特異性抗體結(jié)合。加入能產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物的TMB底物液后，如果顯示藍(lán)色則可知已形成免疫復(fù)合物。所顯示顏色的強(qiáng)度與樣品中登革熱病毒特異性IgG抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應(yīng),以便產(chǎn)生黃色的終點(diǎn)顏色。用一酶標(biāo)儀在450m處讀取OD值。
登革熱IgG檢測所需材料（試劑盒內(nèi)未提供）
| ★ | 可在450/620nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀 | | ★ | 37℃恒溫箱 | | ★ | 自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī) | | ★ | 取樣吸頭（10µl和100µl） | | ★ | 旋渦混合器 | | ★ | 去離子水或雙蒸水 | | ★ | 試管 | | ★ | 計(jì)時(shí)器 |
登革熱IgG檢測試劑盒檢測步驟
實(shí)驗(yàn)開始之前仔細(xì)閱讀操作步驟，嚴(yán)格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果這實(shí)驗(yàn)是在ELISA自動(dòng)系統(tǒng)上進(jìn)行，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時(shí)，洗板3次改成洗板5次，洗滌液從300µl增加到350µl。實(shí)驗(yàn)開始之前，應(yīng)當(dāng)在試劑盒提供的結(jié)果單上標(biāo)記好所有的樣品和質(zhì)控品。取適當(dāng)數(shù)量的板條置于板架上。
請至少做以下幾個(gè)孔：
1孔（例A1）做空白對照孔
1孔（例B1）做陰性質(zhì)控
2孔（例C1+ D1）做臨界質(zhì)控
1孔（例E1）做陽性質(zhì)控
我們建議您將質(zhì)控和病人樣品做雙份檢測。照說明書給出的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并避免不同步驟之間的時(shí)間隔無明顯差別。加每一質(zhì)控品和樣品時(shí)都應(yīng)當(dāng)用新的取樣吸頭。把恒溫箱調(diào)至37 ± 1℃
| 1. | 控品和已稀釋好的樣品分別100µl加入到相應(yīng)的微孔中，留下A1做空白對照孔 | | 2. | 蓋板 | | 3. | 37±1℃下溫育1h±5min | | 4. | 溫育后，移去粘性金屬板，棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，用300µl洗滌液洗板3次。避免反應(yīng)孔中的液體濺出。每次洗板間的浸潤時(shí)間都應(yīng)大于5秒。后在吸水紙上拍干。
注意：洗板步驟很重要，洗板不充分將可能導(dǎo)致結(jié)果不精確或錯(cuò)誤的OD值。 | | 5. | 除空白孔外，在每一微孔中都加入100µl登革熱抗IgG酶標(biāo)物，蓋板。 | | 6. | 室溫下溫育30，避免太陽直射 | | 7. | 重復(fù)步驟4 | | 8. | 在每一微孔中加入100µlTMB底物液 | | 9. | 室溫下（20-25℃）避光溫育15min | | 10. | 按加TMB底物液的順序和速度在每一微孔中加入100µl終止液。
溫育之后，包被板內(nèi)試劑的顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色
注意：高陽性的病人樣品會(huì)引起染色劑沉淀。這些沉淀物會(huì)影響OD值的讀取。例如：我們建議按1：1的比例用生理鹽水預(yù)先稀釋樣品。然后按1：100的比例用稀釋液稀釋樣品，并將結(jié)果乘以2。 | | 11. | 加終止液后30min之內(nèi)在450/620nm處讀取OD值。 |
登革熱IgG檢測試劑盒樣本要求
樣本采集后（保存在2-8℃）應(yīng)該在5小時(shí)內(nèi)用于檢測，否則應(yīng)該保存在-20~-70℃。避免反復(fù)凍融，不推薦使用滅活的樣本。
樣品稀釋：樣品使用樣品稀釋液以1:101的比例進(jìn)行稀釋。
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