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乙腦IgG抗體檢測試劑盒酶聯(lián)傳染病試劑

（德國DRG  EIA4518）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：乙腦IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Japanese Encephalitis IgG ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

該試劑盒在人血清中檢測JEV（日本乙腦病毒）衍生的重組抗原（JERA）（1-4）的抗體IgG。該試劑盒有助于診斷人是否感染了JEV。此試劑盒并不用于血液或血液成分的篩查，該試劑盒目前并沒有用于疫苗優(yōu)化中的血清型研究。

乙腦IgG抗體檢測試劑盒酶聯(lián)傳染病試劑

【實驗原理】

JE IgG酶聯(lián)免疫吸附試劑盒是酶促放大的“兩步"法夾心酶免檢測試劑。

在實驗中，JE IgG陽性質(zhì)控（代表著活性或者可疑活性的血清）、JE陰性質(zhì)控（代表著非活性的血清）與未知的樣本血清在微孔板上孵育。血清樣品用IgG樣品稀釋緩沖液進行稀釋。經(jīng)溫育和洗滌，包被孔加入辣根過氧化物酶標記的抗人特異性IgG。經(jīng)第二次的溫育和洗滌步驟，然后加入TMB底物液溫育。加終止液，酶標儀上檢測。當(dāng)高于一定值時，JERA和質(zhì)控品的吸光值比可準確地測定JEV抗體是否存在。

【試劑盒組成】

檢測日本腦炎IgG酶聯(lián)診斷試劑盒包含了夠96孔（12×8板條）反應(yīng)檢測所需的試劑，試劑盒主要有下列試劑：

檢測日本腦炎IgG的特定材料

1. 包被板：板架，96孔聚苯乙稀微孔板包被了單克隆抗體連結(jié)的重組JERA（A、B、C、D行）和質(zhì)控抗原NCA（E、F、G、H行），在2-8℃下儲存，即用型。

2. 樣品稀釋緩沖液：兩瓶，25ml ，用于血清樣本稀釋；2-8℃下貯存，即用。

3. 日本腦炎病毒（JE） IgG 陽性質(zhì)控：一瓶，50μL。該陽性質(zhì)控也可以用來監(jiān)控試劑盒的完整性。保存在2-8℃，即用型。

4. JE陰性質(zhì)控：一瓶，50μL。該陰性質(zhì)控可以用來監(jiān)控試劑盒的完整性。保存在2-8℃，即用型。

5. 酶聯(lián)物：一瓶，6ml，預(yù)稀釋的HRP標記的羊抗人IgG，在下面的過程使用。保存在2-8℃，即用型。

注意：該酶聯(lián)物需要一直盛在避光瓶中，如所提供的瓶子。

6. 10倍濃縮洗滌液：1瓶, 120ml，內(nèi)含洗滌步驟中將使用到的洗滌緩沖液，2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?/span>

7．Enwash：1瓶，20ml，Enwash在加酶聯(lián)物后和在洗板前使用，在2-8℃下貯存，即用型。

1. TMB底物液：1瓶，9ml，在2-8℃下貯存，即用型。

注意：底物液應(yīng)時刻存放于試劑盒所提供的避光瓶里。

9. 終止液：1瓶6ml，用來終止酶反應(yīng)，2-8℃下貯存，即用型。

警告：含強酸；穿保護手套、面罩和戴安全眼鏡，棄置所有材料均應(yīng)按照安全條例與規(guī)則進行。

實驗所需材料但試劑盒未提供

• 能夠在450mn處測定吸光度的酶標儀

• 生物學(xué)的或高純度水

• 真空泵、洗板機

• 37℃孵箱

• 1-10μl單通道的移液器，50-200μl單通道及多通道的移液器

【樣本采集和制備】

1. 在本實驗中必須使用人的血清，全血或血漿不能直接測定

2. 為避免溶血，應(yīng)盡快將血清從凝血中分離。

3. 在收集（樣品）后應(yīng)盡快開始實驗。不要讓血清在室溫中放置過長的時間。

4. 使用血清以及遵守靜脈采血注意事項。樣品在7天內(nèi)（使用）可貯存于2-8℃,在30天內(nèi)需在-20℃或更低的溫度下凍存。要更長時間的貯存，必需在-70℃凍存，避免反復(fù)凍融樣品。

5. 凍存的樣品須平衡至室溫，在使用前輕輕旋轉(zhuǎn)或倒置使其充分混合，通常在使用前迅速旋轉(zhuǎn)。

6. 如果血清需運輸，其包裝應(yīng)該符合聯(lián)邦的傳染性病原體運輸規(guī)定。

7. 一旦發(fā)現(xiàn)有（微生物）生長不要使用該血清。

【檢測方法】

實驗前將所有試劑和樣本平衡至室溫，使用前輕輕翻轉(zhuǎn)使樣本和試劑充分混勻。

注意：

所有血清，包括實驗所用，均不能反復(fù)凍融，如需長時間貯存，需分裝貯存于-70℃，通常在使用前迅速旋轉(zhuǎn)收集了樣本的玻璃瓶或者試管。

實驗前準備

1. 1X洗滌液準備：用生物學(xué)或者高級別的水將10X的洗滌液稀釋為1X洗滌液，在120ml 10X的洗滌液中加入1080ml的蒸餾水或去離子水，包括任何結(jié)晶, 旋轉(zhuǎn)至充分混合和溶解所有結(jié)晶。在稀釋至1X后，zui多可在室溫下貯存6個月。每次的洗滌為300µL/孔。

注意：使用前檢查1X洗滌液是否有沉淀物、微生物生長或者渾濁，不要使用受污染的1X洗滌液。

1. 微孔板：選擇試驗所需微孔板數(shù)，剩余的未使用的反應(yīng)板條應(yīng)盡快重新放入包裝袋中（含干燥劑）在2-8℃下貯存至使用或至保質(zhì)期。

實驗步驟...................

【質(zhì)量控制】

每試劑盒中均含有陰性和陽性質(zhì)控血清。陰性質(zhì)控和陽性是用于監(jiān)測試劑的實質(zhì)性錯誤，陽性質(zhì)控并不保證試劑臨界值的精確性。如果質(zhì)控ISR值沒有符合說明書的規(guī)定，該實驗無效和必須重做。這些質(zhì)控可接受的免疫狀態(tài)比（ISR）值會在以下的詳細表格中說明。質(zhì)量控制的執(zhí)行必須與地方的，國家的和或聯(lián)盟規(guī)則要求和你實驗的質(zhì)量控制程序標準相*，建議使用者參照NCCLS C24A和42CFR493.1256作為質(zhì)量控制實踐的指引。以下的結(jié)果僅作為例子。

陰性質(zhì)控的計算：用JERA和質(zhì)控抗原計算JE陰性質(zhì)控的平均值................

計算(未知樣本的測定):

計算ISR值：計算未知樣本的JERA平均值和NCA平均值，然后計算JERA/NCA比率（ISR）。

該IgG 測定中ISR少于2.0，那么應(yīng)假定陰性。

該IgG 測定中ISR大于5.0，那么應(yīng)假定陽性。