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C反應蛋白超敏檢測ELISA試劑盒

C反應蛋白超敏檢測ELISA試劑盒
德國DRG進口原裝貨號EIA3954 規(guī)格96T
德國DRG中國*代理商深圳科潤達生物工程有限公司


用于體外診斷用
存儲于2 °C – 8 °C.
 
產品名
C反應蛋白超敏檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
 
預期用途
此超敏CRP ELISA檢測試劑盒能用于人血清中C反應蛋白的定量檢測.檢測C反應蛋白可用于感染,組織損傷,炎癥和相關疾病的輔助檢測.
 
簡介
C反應蛋白于1930年由Tilet和Francis在肺炎患者血清中鑒別出來,因其能結合和沉淀肺炎球菌C多糖而得名.它是一種分子量約為110,000-140,000道爾頓,由5個相同亞單位(由非共價鍵結合成的循環(huán)五聚物)組成的α球蛋白.C反應蛋白在肝臟中合成,正常情況下血清和血漿含量很少,濃度約為0.3 mg/dl.它具有廣泛的生理學意義,但與其它免疫球蛋白具有幾種相似的功理,主要表現(xiàn)為機體防御.
C反應蛋白是種急性期蛋白,在多種疾病的非特異性反應過程中(包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性微生物感染,風濕性關節(jié)炎,腹膿腫,膽管發(fā)炎等),患者血清和血漿中的含量水平都會劇增.在格林-巴利綜合征,多發(fā)性硬化,特定的病毒感染,肺結核,急性傳染性肝炎,多種神經和炎癥疾病,灼傷和外科術后的病人體內也能觀察到高濃度的C反應蛋白.
盡管檢測血清中C反應蛋白上升的濃度不能作為特定疾病的指標,但對于多種炎癥的病發(fā)研究是很有意義的.急性組織損傷后,在24-48小時內血清或血漿中C反應蛋白的濃度就迅速上升,急性期間達到(大約上升1000倍),創(chuàng)傷或炎癥治療后,其濃度立即下降.人血清或血漿中C反應蛋白的濃度,在降至正常水平前會持續(xù)幾天的上升.檢測C反應蛋白可作為炎癥病變過程的標記物,甚至比紅細胞沉降速度這種指標更可靠和靈敏.因為紅細胞沉降速度會受到非炎癥進程機體的生理變化的影響.常見檢測C反應蛋白的方法包括:乳膠凝集試驗,比濁法,放射免疫擴散法.但這些方法的靈敏度都很低,而ELISA方法的靈敏度和特異性更高.
由于上升濃度的C反應蛋白往往與病理改變存在緊密,故也可作為診斷,治療,炎癥監(jiān)測和相關病癥的有效輔助工具.此外,通過高靈敏度的方法檢測C 反應蛋白也可增強其它心肌標記物(如肌紅蛋白,肌鈣蛋白I和T)的預測價值,有利于心血管和外圍血管疾病的風險評估.由于C反應蛋白值的上升為非特異性,所以需結合患者病歷評估與先前的檢測值作對比進行分析.
 
 
實驗原理
超敏CRP檢測試劑盒基于酶免法原理,試驗中采用了抗CRP的特異性單克隆抗體,包被板上包被了抗CRP抗體鼠單抗,,HRP標記的抗CRP抗體羊抗,試驗樣本與這兩個抗體反應,樣本中CRP分子在固相抗體和酶聯(lián)物抗體之間,室溫下45min孵育過后,洗板,除去未結合的標記抗體,TMB底物液加入,孵育20min,變成藍色,以1N HCL終止顏色反應,變成黃色
樣本中的CRP濃度與顏色強度成正比,450nm處檢測吸光值
試劑盒組成
 

  1. 包被板,96孔,包被有抗CRP小鼠單抗
  2. 標準品,1.0ml/支,濃度分別為:0;0.005;0.010;0.025;0.050;0.100mg/L,,    含防腐劑,即用
  3. 樣本稀釋液,50ml/支,含磷酸緩沖液-BSA溶液,含防腐劑
  4. 酶聯(lián)物,12ml/支,含HRP標記的抗CRP羊抗,含防腐劑
  5. TMB底物液,11ml/瓶,TMB
  6. 終止液,11ml/瓶,1N 鹽酸

實驗所需器材但試劑盒未提供
 

  1. 移液器:5ul;10ul;50ul;100ul;1.0ml
  2. 一次性槍頭
  3. 酶標儀
  4. 混合器或相關儀器
  5. 吸水紙
  6. 坐標紙

貯存條件
 

  1. 未開封的試劑盒可在2-8℃下保存至有效期
  2. 保持微孔板保存于含有干燥劑的密封袋內,盡可能避免接觸潮濕的空氣

試劑準備
 

  1. 實驗前將所有試劑平衡至室溫(18 °C – 25 °C)
  2. 實驗前病人血清應稀釋100倍,如5ul的血清+495ul的樣本稀釋液;

標準品不需要稀釋
 

  1. 稀釋后的樣本CRP濃度仍超過了10mg/L時,應進一步進行稀釋(10倍)(如10ul 已100倍稀釋的樣本+90ul樣本稀釋液)

樣本采集與準備
 

  1. 此試驗需使用血清樣本
  2. 標準靜脈采血技術采集樣本,采集后60min內分離出血清
  3. 24小時內樣本不使用的話,需貯存于-20℃或更低,可保存6個月
  4. 避免使用溶血(鮮紅色),脂血(乳白色)或渾濁樣本(離心后)
  5. 樣本不能反復凍融,不要將樣本貯存于無霜冷凍機內,凍存的樣本和渾濁樣本或含有其他微粒物質的樣本,在使用前都需要進行離心

操作注意事項
 

  1. 加樣建議(單通道或多通道):所有標準品,樣本和質控加樣應在3min之內完成
  2. 所有標準品,樣本和質控都做雙孔檢測
  3. 加入終止液后15min內讀數(shù)

實驗步驟
 

  1. 實驗前病人樣本和質控稀釋100倍,見“試劑準備”;不要稀釋標準品
  2. 將實驗所需包被板固定于板架上
  3. 將10ul的標準品,稀釋的樣本,稀釋的質控加于相應孔內
  4. 每孔加100ul的CRP酶聯(lián)物
  5. 充分混合30秒,充分混合相當重要
  6. 室溫下(18-25℃)孵育45min
  7. 迅速棄去反應液,用去離子水或雙蒸水洗板5次,不要使用自來水
  8. 吸水紙上拍干,去除殘留液滴
  9. 每孔加100ul的TMB底物液,輕輕混合5秒
  10. 室溫下孵育20min
  11. 每孔加終止液100ul
  12. 輕輕混合30秒,確保藍色溶液全轉變?yōu)辄S色
  13. 15min酶標儀上讀數(shù)(450nm)

結果計算
 

  1. 計算各標準品,樣本的平均OD值
  2. 以標準品的濃度為X軸,OD值為Y值,繪制標準曲線
  3. 樣本濃度值可從標準曲線上直接得到;也可使用相關數(shù)據處理軟件得到實驗結果
  4. 所得樣本濃度值還需乘以稀釋因子100,而得到zui終結果
  5. 若樣本濃度高于10mg/L,需進一步稀釋(10倍),所得結果需乘以1000
  6. 注意:病人樣本CRP濃度低于0.1mg/L的記錄為<0.1mg/LCRP

標準曲線示范
 
以下為以CRP的濃度為X軸,相應的吸光值為Y軸的典型標準曲線.
提示:此標準曲線僅供演示說明用,不能用于未知樣品的計算.每個實驗室在每次實驗都應建立自已的數(shù)據和標準曲線.

期望值
建議每個實驗室都應在健康人群的基礎上建立自己的正常值范圍;以下是出版的文獻中提及的健康人群的CRP值
正常血清:0.01—0.35mg/L
成人血清:0.068—8.2mg/L
 
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