金屬蛋白酶組織抑制因子Elisa試劑盒-深圳市科潤達生物工程有限公司

9. 試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應當作潛在生物有害物質(zhì)進行處理。

貯存和穩(wěn)定性

試劑盒應當在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射。準備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應章節(jié)已闡明。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。

樣品采集和貯存

注意：不要使用血清，因為在血清制備過程中，a-粒細胞會不受控制的釋放出TIMP-1。TIMP-1只能用血漿檢測

血漿（EDTA）

注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應保持血液樣品的化學整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實驗前應當離心以除去所有的微粒物質(zhì)。
儲存	2-8℃	≤-20℃	避免熱源和太陽直射，避免反復凍溶。
穩(wěn)定性	48小時	6個月	避免熱源和太陽直射，避免反復凍溶。

試劑盒組成

劑量/數(shù)量	標志	成分/部件
1×12×8	MTP	微量滴定板（包被板）可拆，包被了抗-TIMP-1抗體（羊）
1×0.1mL	ENZCONJ CONC	酶聯(lián)物（101×）濃縮 HRP標記的抗TIMP-1抗體，穩(wěn)定劑
6×0.5mL	CAL A-F	標準品A-F 濃度為：0,10.2,51,102,204,510ng/ml 即用，包含：TIMP-1，穩(wěn)定劑
2×0.5mL	Control 1+2	質(zhì)控品 1+2 即用，包含：TIMP-1，穩(wěn)定劑濃度/可接受范圍見質(zhì)控單
1×12mL	ASSAYBUF CONC	試驗緩沖液，20X 包含：磷酸緩沖液，BSA和Proclin300
1×100mL	WASHBUF CONC	洗滌液，（10×）濃縮包含：磷酸緩沖液，吐溫
1×12mL	TMB SUBS	TMB底物液即用，包含：TMB，緩沖液，穩(wěn)定劑
1×12mL	TMB STOP	TMB終止液即用，包含：0.5M 硫酸
3×	FOIL	粘合金屬板（封板片）

實驗所需材料但試劑盒未提供

1. 移液器體積：5,20,50,100,1000ul

2. 一次性玻璃試管

3. 混合器

4. 8通道移液器

5. 洗瓶，全自動或半自動洗板機

6. 酶標儀

7. 去離子水或雙蒸水

8. 吸水紙，槍頭和計時器

操作注意事項

1．樣品處理不當或者修改實驗步驟都會影響到結(jié)果，必須嚴格按照說明書的步驟進行實驗。

2．一旦實驗開始，所有步驟必須完整的進行下去，必須確定實驗所需的試劑及物品都在適當時間內(nèi)準備好，實驗開始前讓試劑和樣本都平衡至室溫，（18~25℃），試劑和樣本在使用之前混勻應避免起泡沫。

3．避免污染試劑，槍頭和微孔/管。每個微孔的加樣都應該用新的槍頭，避免將不同試劑的蓋子蓋錯，用完試劑后要蓋好蓋，不要重復使用用過的微孔/管、試劑。

4. 有些組分溶液＜250ul，打開瓶蓋之前確保溶液全部在瓶底

5．建議對樣本進行兩次測試，鑒定潛在的吸量錯誤

6．設計一個合適的包被板布局

7．孵育時間影響結(jié)果，所有的孔必須在同樣順序和時間間隔下加樣，這里推薦使用8道移液器加樣。

8．洗板是非常重要的，不恰當?shù)南窗鍟е洛e誤的結(jié)果。這里推薦使用洗板機。孵育時不要讓孔干燥。小心地棄去試劑，當洗板時應當讓孔內(nèi)裝滿洗滌緩沖液，并且沒有其他殘留物留在孔內(nèi)。

9．濕度會影響包被孔/管。在平衡至室溫之前不要開袋。沒有使用的板孔應立即用含有干燥劑的可重封小袋重新封緊。

試劑準備

凍干或濃縮成分的準備

稀釋溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩(wěn)定性
10ml	洗滌濃縮液	90ml	去離子水	1:10	充分混勻	2-8℃	4周
1ml	試驗緩沖濃縮液	19ml	去離子水	1:20	充分混勻	2-8℃	1周
20ul	酶聯(lián)物濃縮	2ml	稀釋的試驗緩沖液	1:101	混勻，避免產(chǎn)生氣泡	現(xiàn)配現(xiàn)用

樣品稀釋

病人樣品			比例	備注
血漿（EDTA）	常規(guī)稀釋	稀釋的試驗緩沖液	1:51	e.g. 10 µL + 500 µL

實驗步驟

1. 吸取50ul的標準品，質(zhì)控品和病人樣品于相應的孔內(nèi)

2. 每孔加入50ul的稀釋的酶聯(lián)物，蓋板，小心振蕩微孔板

3. 室溫下（18-25℃）孵育90min

4. 移去蓋板，棄去廢液，每孔加入250ul的洗滌液洗板5次，吸水紙上拍干

5. 每孔加入100ul的TMB底物液

6. 室溫下孵育30min

7. 每孔加入100ul的終止液，小心混勻，液體顏色由藍色變?yōu)辄S色

8. 加入終止液后15min 內(nèi)酶標儀上讀數(shù)

計算結(jié)果

在半對數(shù)坐標紙上或自動計算的方法，以標準品的OD值（Y軸，線性）對其濃度（X軸，對數(shù)）做一條標準曲線。使用三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程可以得到更好的標準曲線。在推算標準曲線時，應當充分利用好每一個標準品數(shù)值（明顯逸出的數(shù)值應當被忽略，再使用更合理的數(shù)值代替它）。樣品的濃度可以從標準曲線上直接讀取

將稀釋了的樣品結(jié)果乘以稀釋因子即可得到其相應的結(jié)果

附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數(shù)，如坐標參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果

正常值

此檢驗結(jié)果不能作為治療結(jié)果的*原因，還應結(jié)合臨床觀察和診斷試驗

健康人群EDTA血漿中的TIMP-1的值低于100ng/ml（95%：100ng/ml；90%：80ng/ml）

我們建議每個實驗室都應建立自己的正常值范圍

檢驗方法的局限性

樣品的采集對試驗結(jié)果有著重要的影響，請仔細閱讀“樣品采集和貯存”的部分

以下物質(zhì)低于下面所述濃度，其實驗結(jié)果都會不明顯