DHT 雙氫睪酮 ELISA試劑盒
德國IBL*，貨號：DB52021
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1、應(yīng)用范圍
此ELISA試劑盒可用于人血清中二氫睪酮的定量檢測。注：僅供體外診斷用。
2、實驗原理
此ELISA試劑盒采用的是典型的競爭法。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品中的未標(biāo)記抗原和酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合包被板上有限的抗體結(jié)合位點。洗板以除去未結(jié)合的物質(zhì)。洗板后，加入酶底物液。zui后加入終止液以終止酶反應(yīng)，并在酶標(biāo)儀上讀取OD值。包被孔中溶液所顯示的顏色與樣品中DHT的量成正比。實驗中所用的標(biāo)準(zhǔn)品可作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，我們可以直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品和質(zhì)控品中DHT的量。
3、臨床應(yīng)用
5α-二氫睪酮（DHT）是一種類似于睪酮和雄烯二酮的類固醇激素，屬于雄性激素類。 DHT是一種含19個碳的類固醇，并具有雄性激素的活性。雄性激素主要由睪丸的萊迪希細(xì)胞分泌。循環(huán)于血液中的雄性激素會結(jié)合到一些蛋白質(zhì)上，尤其會結(jié)合到SHBG（性激素結(jié)合蛋白）和清蛋白上。只有極少一部份以未結(jié)合的形式存在于血液中，被稱為游離部份。DHT對SHBG的親和力是睪酮對SHBF親和力的3倍。在男性中，有70％的DHT是由外周睪酮轉(zhuǎn)化而來；而在女性中，大多數(shù)DHT是由雄烯二酮轉(zhuǎn)化而來。肝是抑制雄性激素功能的主要器官。因此，類固醇激素在肝中都會發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，人們普遍認(rèn)為這各種結(jié)構(gòu)改變是其生物活性喪失的必要條件。在到達(dá)腎排泄前，此種類固醇會形成一些代謝產(chǎn)物，而有些類固醇又會回到血液循環(huán)中。因此，人體內(nèi)的類固醇激素是通過尿液排出體外的。臨床傾向：在克蘭費爾特綜合征中，DHT的水平比正常人的要低很多。在先天性多毛癥患者中，有40％以上患者的DHT水平都會升高。在多囊卵巢患者中，大約35％患者的DHT水平會升高。成年人的DHT水平比正常老年人的DHT水平要高很多，因此雄性激素在青春期的分泌量會增加，這樣它就可以促進男性第二性征的形成。人們已經(jīng)證實:人睪丸的生精小管可產(chǎn)生DHT。因此，在生精小管受損時，DHT的生成就會受阻，從而導(dǎo)致血漿DHT水平降低（例如：生殖細(xì)胞不發(fā)育癥和精子缺乏癥患者）。無睪畸形患者的血漿DHT的水平就非常低。據(jù)報道：在一些前列腺癌患者中（特別是第四階段），DHT的檢測有益于預(yù)測抗雄性激素治療的治療效果。
4、樣品的采集與儲存
進行一次雙份檢測大概需要0.2ml血清。采集4-5ml血液到相應(yīng)的標(biāo)記試管中，并待其凝血，離心獲取血清。4℃下可穩(wěn)定存放24個小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存-10℃的環(huán)境或更低溫度下。
5、樣品預(yù)處理
此檢測系統(tǒng)是一直接檢測系統(tǒng)，不需要進行任何樣品預(yù)處理。
6、實驗所需器材但試劑盒不提供
1）移液器，50；100；150和300μl
2）取樣吸頭
3）蒸餾水或去離子水
4）搖床
5）酶標(biāo)儀
7、試劑盒成份
1）兔抗DHT抗體包被的可拆包被板，即用。內(nèi)含：抗DHT抗體包被的96孔包被板，密封于含干燥劑的包半裝袋中，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。
2）HRP標(biāo)記的DHT酶聯(lián)物，50倍濃縮型，內(nèi)含：HRP標(biāo)記的DHT酶聯(lián)物、蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：200μl/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用檢測緩沖液按1：100的比例進行稀釋（例如：20μl HRP酶聯(lián)物中加入2ml檢測緩沖液。如果整個包被板都使用，可以用12ml檢測緩沖液稀釋120μl HRP酶聯(lián)物，棄去剩余試劑。
3）DHT標(biāo)準(zhǔn)品，即用。6支，內(nèi)含：DHT、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的DHT制備而成。下表為標(biāo)準(zhǔn)品的大概濃度，具體濃度請見試劑瓶標(biāo)簽：
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 濃度 | 體積/支 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 A | 0 pg/ml | 2.0 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 B | 25 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 C | 100 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 D | 500 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 E | 1000 pg/ml | 0.6 ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 F | 2500 pg/ml | 0.6 ml |
儲存于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上有效期，一旦打開，所有的標(biāo)準(zhǔn)品都必須在14天內(nèi)用完或?qū)⑵鋬龃?，避免反?fù)凍融。
4）質(zhì)控品，即用，1支，內(nèi)含：DHT、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的DHT制備而成，具體濃度及可接受范圍請見試劑瓶標(biāo)簽。體積：0.6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期，一旦打開，所有的質(zhì)控品都必須在14天內(nèi)用完，必免反復(fù)凍融。
5）濃縮冼滌液，10倍濃縮型，1支，內(nèi)含：緩沖液、非離子型去垢劑和無汞防腐劑，體積：50ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，有效期：12個月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用蒸餾水或去離子水按1：10的比例進行稀釋，如果整個包被板都使用，可用450ml蒸餾水稀釋50ml濃縮冼滌液。
6）檢測緩沖液，即用，1支，內(nèi)含：蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：15ml/支，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。
7） TMB底物液，即用，1支，內(nèi)含：TMB、過氧化氫和非DMF或DMSO，體積：16ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。
8） 終止液，即用，1支，內(nèi)含：1M的硫酸，體積：6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。
8、實驗步驟
樣品預(yù)處理：無
使用前必須將所有的試劑都平衡到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品都必須作雙份檢測，一旦實驗開，所有的步驟都必須完整的進行下去。
1）制備好即用型的HRP酶聯(lián)物和檢測緩沖液。如果用尿液作實驗，應(yīng)將尿液稀釋好。
2）取出所需數(shù)目的板條，將不用的板條重新密封于包裝袋中并冷藏。
3）將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品（血清或已稀釋好的尿液）分別50μl加入到相應(yīng)的微孔中（雙份檢測）
4）在每一微孔中加入100μl酶聯(lián)物（建議您使用多道移液器）。
5）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上（200rpm）溫育1個小時。
6）每孔用300μl洗滌液洗板3次，并在吸水紙上拍干。
7）以相同的時間間隔，在每一微孔中加入150μl TMB底物液。
8）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上溫育15-20分鐘。
9）在每一微孔中加入50μl終止液。
10）加終止液后20分鐘內(nèi)450nm處讀取OD值。
*如果OD值超過450nm濾光片的檢測上限，我們可用405n或415nm代替，OD值可能會比較低，但它并不會影響樣品和質(zhì)控品的實驗結(jié)果。
9、結(jié)果計算
1）計算兩個標(biāo)準(zhǔn)品OD值的平均值。
2）在半對數(shù)坐標(biāo)紙上，以平均OD值為Y軸、標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸作一條校準(zhǔn)曲線。如果使用免疫檢測軟件，我們可以作四參數(shù)曲線。
3）計算每一未知樣品OD值的平均值。
4）直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品的濃度。
5）將獲得的樣品濃度值乘以稀釋因子。然后乘以24小時尿液的體積，從而其閃單位可變?yōu)閜g/24小時。zui后將pg/24小時除以106，相應(yīng)的單位就變成μg/24小時。
6）如果血清樣品濃度高于2500pg/ml,我們可以用標(biāo)準(zhǔn)品A將其進行稀釋（但稀釋比例不高于1：8）。則其結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。
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