人可溶性淀粉樣前體蛋白（超敏）檢測試劑盒
（日本IBL*，貨號:27734）
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前言介紹
阿爾茨海默?。ˋD）是德國神經(jīng)病理學(xué)家A. Alzheimer于1907年公布的,它被*是導(dǎo)致癡呆的主要因素.
原理
此固相ELISA檢測試劑盒運用兩個高特異性抗體.加入TMB底物液后作為顯色劑.顯色的強度與人的可溶性淀粉樣前體蛋白α（sAPP
α）的量成正比.
檢測范圍
0.78- 50ng/mL
預(yù)期用途
供研究用,不能用于診斷步驟.
■ 此IBL檢測試劑盒能用于人血清,EDTA血漿,
腦脊液,細(xì)胞培養(yǎng)基上清液的sAPP的定量檢測.
■ 建議血清樣本，EDTA-血漿樣本稀釋4-8倍.
■ 腦脊液樣品超過4倍.
■ 如果細(xì)胞培養(yǎng)上清中含有血清如FCS，可能會有交叉反應(yīng)，建議設(shè)置一個陰性介質(zhì)質(zhì)控
試劑盒組成
1預(yù)包被板:抗人-sAPP
α （2B3）小鼠IgG單克隆抗體,親和純化 96T
2濃縮酶標(biāo)抗體 （30X）HRP標(biāo)記的抗人APP（R101A4）小鼠
IgG單抗,Fab’親和純化 0.4 mL x 1
3標(biāo)準(zhǔn)品:重組人sAPPα蛋白 0.5mL x 2
5酶聯(lián)物稀釋液 1%的BSA ,0.05%吐溫20的PBS 12mL x 1
8濃縮洗滌液:40× 0.05%吐溫20的磷酸緩沖液 50mL x 1
操作說明
1所需實驗器材（但本試劑盒沒有提供）
酶標(biāo)儀（450nm） 微量移液管及槍頭
量筒及燒杯 去離子水
冰箱（4°C） 坐標(biāo)紙（log/log）
吸水紙 試管
洗瓶
用于“2濃縮酶標(biāo)抗體”及“6底物液:TMB溶液”的一次性試管
2準(zhǔn)備
1） 洗滌液的準(zhǔn)備
“ 8濃縮洗滌液”是一種40倍的濃縮液.放置至室溫后,把50 mL的濃縮液溶于1950 mL的去離子水中制成稀釋洗滌液,置于冰箱中能保存2周.
2） 酶聯(lián)物的準(zhǔn)備
“2濃縮酶標(biāo)抗體
”是一種30倍濃縮物,使用一次的試管用“5酶聯(lián)物稀釋液” 稀釋“2濃縮酶標(biāo)抗體”制成所需酶聯(lián)物.（按1:30稀釋）
舉例：如果你使用的是8孔的，那我們需要配置800ul的標(biāo)記抗體，30ul 的“2濃縮酶標(biāo)抗體”和870ul的“ 5酶聯(lián)物稀釋液”混合，每孔加100ul
3） 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備
取
0.5 mL的去離子水稀釋瓶裝的”3標(biāo)準(zhǔn)品
”,混勻制成100 ng/mL的人sAPPα標(biāo)準(zhǔn)品
4） 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋
準(zhǔn)備8支試管用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋并編號.各加230μL
”4EIA緩沖液”于各試管中.取230 μL標(biāo)準(zhǔn)品溶液于試管1,混勻.然后再從試管1中取230 μL溶液放到試管2中,按此規(guī)律,如下圖如示配制系列標(biāo)準(zhǔn)品.第8支試管為0 ng/mL作為零標(biāo)準(zhǔn)品.
5） 樣本的稀釋
樣本必需用試劑盒提供的
”4EIA緩沖液”稀釋.如果樣本中的sAPPα濃度范圍不清楚,建議預(yù)配制幾種不同濃度來確定合適的檢測濃度.
檢測步驟
將所有的試劑平衡至溫室（大約30分鐘）,使用前混勻.確保試劑無質(zhì)量問題.在檢測樣本的同時要準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)曲線.
1設(shè)試劑空白對照.加100μL“4EIA緩沖液”于微孔中.
2各加100μL樣本空白（試管8）,系列標(biāo)準(zhǔn)品（試管1-7） ,樣本于相應(yīng)的各孔中.
3在蓋板后在4°C孵育過夜
4用洗滌液洗板.然后在加入洗滌緩沖液,無需蓋板放置15-30秒左右,再*移除洗滌緩沖液.此步驟需重復(fù)至少7次. zui后在吸水紙上輕扣去除殘留液滴.
如有用自動洗板機,在洗板機上洗板4次后,上述的人工洗滌步驟仍需重復(fù)3次
5各加100 μL酶聯(lián)物溶液于各孔中.
6蓋板后在4°C下孵育30分鐘
7按步驟4洗板9次.
8加所需量的“6底物液:TMB溶液”至一次性的試管中.再各取100 μL底物液于相應(yīng)各孔中.注意一次性試管內(nèi)的多余底物液切勿倒回瓶中,避免交叉感染.
9避光在室溫下孵育包被板30分鐘.加入底物液后,孔內(nèi)的液體會變成藍(lán)色.
10各加100μL“7終止液”至各孔中,輕扣板條混勻.加入終止液后孔內(nèi)的液體會變成黃色.
11去除板底的污垢或液滴,確保無氣泡形成,在加入終止液后30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀于450 nm處測其吸光度值.
特別注意
1樣本收集后應(yīng)立即檢測.如是冷凍儲存的樣本,則需解凍,避免反復(fù)凍融.
2樣本必需用“4EIA緩沖液”稀釋.
3建議樣本和各標(biāo)準(zhǔn)品做雙份檢測
4樣本應(yīng)保持在中性PH范圍內(nèi).因為有機溶劑的污染會影響檢測結(jié)果
5只可以用試劑盒提供的洗滌緩沖液用于洗板,不充足的洗板可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果.
6在吸水紙上輕扣板去除殘留液滴.切勿用吸水紙刮擦微孔.
7“6底物液”需避光保存,避免讓其與金屬接觸.
8加“ 7終止液”后,30分鐘內(nèi)必需讀數(shù).
結(jié)果分析與計算
所有的測量的吸光度值（包括標(biāo)準(zhǔn)品,未知檢測樣本）都需減去空白對照的吸光度值.在雙對數(shù)坐標(biāo)紙上,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo),以相對應(yīng)的吸光度作為縱坐標(biāo),通過光滑的點繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.檢測樣品的濃度可直接在標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取.
以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例演示,不能用于樣本結(jié)果的讀取.每次檢測都必需建立其標(biāo)準(zhǔn)曲線.
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。
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