德國IBL肺炎衣原體IgM ELISA試劑盒
（貨號：RE57051）
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1、 前言說明
衣原體是一種不能運動的革蘭氏陽性菌，同時也是一種強制性的胞內(nèi)寄生菌，而且這種細菌可在其寄主細胞的胞漿內(nèi)形成明 顯的包涵體。這種包涵體在光學(xué)顯微鏡下很容易看到。目前人們知道有三種不同的衣原體對人具有至病性，它們是：沙眼衣原體、肺炎衣原體和鸚鵡衣原體，還有一 種對動物具有至病性的衣原體（獸類衣原體）。沙眼衣原體是世界上性傳播疾病zui流行的傳播因子（4000-5000萬例），并且此傳染病的數(shù)量還在不斷增 加。感染了沙眼衣原體的孕婦可以在分娩時將病毒傳染給胎兒，從而導(dǎo)致胎兒患結(jié)膜炎或肺炎。 衣原體感染不治療的個體會導(dǎo)致慢性輸卵管炎，并且很有可能出現(xiàn)宮外孕或不孕。在男性中，沙眼衣原體是導(dǎo)致非淋球菌性尿道炎的主要因素。在衣原體感染中，頻 繁性的無癥狀隱性階段是一個很嚴重的問題，因為它可能啟動慢性疾病。在許多例子中，原發(fā)性感染都沒有被發(fā)現(xiàn)，之后只能檢測到由持續(xù)上升病原體而引起的后遺 癥。
| 種類 | 感染機制 | 疾病 | 診斷方法 |
| 沙眼衣原體 | 直接傳播或性傳播：主要感染部位是眼或泌尿生殖道黏膜 | 淋巴性肉芽腫，沙眼，新生兒或成年包涵體性結(jié)膜炎，宮頸炎、輸卵管炎、尿道炎、附睪炎、直腸炎及新生兒肺炎。 | 血清學(xué) |
| 肺炎衣原體 | 呼吸道黏膜浸潤 | 呼吸道疾病 有爭議的疾?。盒膬?nèi)膜炎，冠心病 心臟病 | PCR |
| 鸚鵡衣原體 | 吸入受染禽類的糞便；接觸了受染禽類的內(nèi)臟。 | 飼鳥病（鸚鵡熱） | 鏡檢 |
可通過以下方法來檢測是否感染：
n 鏡檢：Giemsa染色
n PCR
n 血清學(xué)：用ELISA檢測抗原
用IF、EIA或ELISA檢測抗體
2、應(yīng)用范圍
IBL公司的肺炎衣原體IgM ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎衣原體IgM抗體的定性檢測。
3、實驗原理
抗肺炎衣原體IgM抗體的定性免疫酶檢測利用的是ELISA技術(shù)。包被板上預(yù)先包被了能結(jié)合樣本中相關(guān)抗體的肺炎衣 原體抗原。洗板以除去未結(jié)合的樣品物質(zhì)，之后加入辣根過氧酶標記的抗人IgM。之后，酶標物會結(jié)合到捕獲的肺炎衣原體特異性抗體上，加入能產(chǎn)生藍色反應(yīng)產(chǎn) 物的TMB底物液后，如果顯示藍色則可知已形成免疫復(fù)合物。所顯示顏色的強度與樣品中肺炎衣原體特異性IgM抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應(yīng),以便產(chǎn) 生黃色的終點顏色。用一酶標儀在450m處讀取OD值。
4、材料
4.1試劑盒成分
1） 肺炎衣原體包被板（IgM）：12×8，可拆，微孔中包被了肺炎衣原體抗原，真空密封。
2） IgM樣本稀釋液：1瓶，100ml，用于樣品的稀釋，內(nèi)含抗人IgG，PH為7.2±0.2，即用，綠色白蓋。
3） 終止液：待用硫酸，1 瓶，15ml，內(nèi)含硫酸，0.2mol/l，紅蓋。
4） 濃縮洗滌液（20X）：1瓶，50ml，PH為7.2±0.2 ，白蓋。
5） 肺炎衣原體抗IgM酶標物：1瓶，20ml，內(nèi)含過氧化物酶標記的兔抗人IgM，紅色黑蓋。即用。
6） TMB底物液，1 瓶，內(nèi)含TMB，黃蓋，15ml，即用。
7） 肺炎衣原體IgM陽性質(zhì)控，1 瓶 ，黃色液體，2ml，紅蓋
8） 肺炎衣原體IgM臨界質(zhì)控，1 瓶 ，黃色液體，2ml，綠蓋
9） 肺炎衣原體IgM陰性質(zhì)控，1 瓶 ，黃色液體，2ml，藍蓋
4.2 實驗所需材料和器材
1） 酶標儀，可在450/620測吸光度值
2） 37℃孵化器
3） 手工或自動微孔清理設(shè)備
4） 10µl和1000µl的取樣吸頭
5） 旋渦混合器
6） 去離子水或蒸餾水
7） 試管
8） 記時器
5．樣本貯藏和準備：
5.1用人血清做為樣本。如果檢測在樣品收集后24小時內(nèi)進行，則樣品應(yīng)當存放與2-8℃的環(huán)境下；否則應(yīng)當將其貯存于-70℃—20℃的環(huán)境下。如果樣品被凍存過，則在檢測之前應(yīng)小心解凍樣品，避免反復(fù)凍溶。
5.2樣品的稀釋
檢測前，所有的每樣品都應(yīng)按1：100的比例當用IgM樣品稀釋液進行稀釋。在10µl樣品中加入1ml IgM樣品稀釋液，旋渦混合器上*混合。陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控不需要稀釋，待用。
6．實驗步驟：
實驗開始之前仔細閱讀操作步驟，嚴格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實驗結(jié)果。如果這實驗是在ELISA自動系統(tǒng)上進 行，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時，洗板3次改成洗板5次，洗滌液從300µl增加到350µl。實驗開始之前，應(yīng)當在試劑盒提供的結(jié)果單上標 記好所有的樣品和質(zhì)控品。取適當數(shù)量的板條置于板架上。
請至少做以下幾個孔：
1孔（例A1）做空白對照孔
1孔（例B1）做陰性質(zhì)控
2孔（例C1+D1）做臨界質(zhì)控
1孔（例E1）做陽性質(zhì)控
如果有必要的話，我們建議您質(zhì)控和病人樣品做雙份檢測。照說明書給出的實驗步驟進行操作，并避免不同步驟之間的時間隔無明顯差別。加每一質(zhì)控品和樣品時都應(yīng)當用新的取樣吸頭。把恒溫箱調(diào)至37 ± 1℃
1） 加100µl質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，留A1孔做空白。
2） 蓋板
3） 37℃±1℃下溫育60+5分鐘。
4） 溫育之后，移去粘性金屬板，棄去孔內(nèi)反映液，用300µl洗滌液洗板3次，每次洗板循環(huán)間的時間間隔應(yīng)大于5秒，并在吸水紙上拍干。
注意：洗板很重要，如果洗板不充分，則檢測結(jié)果會不，而且會錯誤的提高OD值。
5） 除空白孔外，加100µl 肺炎衣原體抗IgM酶標物于各孔中，蓋板。
6） 37℃±1℃下避光溫育30+2分鐘。。
7） 重復(fù)步驟4。
8） 每孔加100µl TMB底物液。
9） 室溫避光溫育30分鐘。
10） 以加底物一樣的順序和速度在每孔中加入100µl終止液。
11） 30分鐘內(nèi)在450nm讀吸光度。
7．結(jié)果判定：
1）必須符合以下條件, 實驗結(jié)果才能成立.
空白孔A1：OD＜0.100
陰性質(zhì)控孔B1：OD＜0.200
臨界質(zhì)控孔C1和D1：OD值界于0.250---0.900
陽性質(zhì)控孔E1：OD大于或等于臨界
2）結(jié)果計算：cut-off值是臨界質(zhì)控檢測結(jié)果的平均值
例如：臨界質(zhì)控OD值1.44+臨界質(zhì)控OD值0.42=0.86/2=0.43
Cut-off值=0.43
3）結(jié)果解釋：
如果樣品的OD值比cut-off值高10%以上則認為此樣品呈陽性
如果樣品的OD值在比cut-off值高或低10%的范圍內(nèi)，則認為次樣品是可疑的。（灰色區(qū)域）建議2-4周后用新鮮樣品重復(fù)檢測，如果結(jié)果仍位于灰色區(qū)域內(nèi)，在認為此樣品為陰性。
如果OD值比cut-off值低10%以上則認為此樣品呈陰性。
4）實驗結(jié)果的單位
病人的（平均）OD值x 10 Cut-off值
例如：
1.204 x 10 0.43
臨界值：10U
灰色區(qū)域：9-11U
陰性：＜9 U
陽性：＞11 U
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。
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